Медицинский справочник: ВектоВКЭ-IgM-стрип (Тест-система иммуноферментная для выявления иммуноглобулинов класса Мк вирусу клещевого энцефалита) - опис

Название: ВектоВКЭ-IgM-стрип (Тест-система иммуноферментная для выявления иммуноглобулинов класса Мк вирусу клещевого энцефалита)
Перед применением лекарственного препарата ВектоВКЭ-IgM-стрип (Тест-система иммуноферментная для выявления иммуноглобулинов класса Мк вирусу клещевого энцефалита) вы должны проконсультироваться с врачом. Данная инструкция предназначена только для ознакомления и не предназначено для назначения лечения без участия врача.

Другие препараты группы МИБП-диагностикум

В Китае самим рациональным и ничем незаменимым средством против заболевания горла считается морская вода.

При использовании материалов сайта гиперссылка на сайт Медицинский Справочник обязательна. Все вопросы и предложения на spravochnik03@gmail.com
2016. Spravochnik03.com

Содержание вирусного антигена в прививке от клещевого энцефалита

Для количественного определения содержания вакцинного антигена в вакцине клещевого энцефалита, на предприятии НПО «Вирион» (филиал «НПО «Микроген») разработан стандартный образец предприятия (СОП) вакцинного антигена вируса КЭ. СОП аттестован в соответствии с требованиями стандартизации, и калиброван по содержанию протективного белка Е. Показана принципиальная возможность определения содержания вакцинного антигена в вакцине КЭ на примере нескольких серий вакцины «Энцевир».

Клещевой энцефалит представляет одну из наиболее серьезных проблем инфекционной патологии в РФ. Несмотря на принимаемые меры, заболеваемость КЭ в РФ высока — от 2000 до 3000 больных в год. Одним из эффективных средств борьбы с остается профилактическая прививка от клещевого энцефалита населения, проживающего в регионах его природных очагов [1, 2].

В настоящее время в РФ зарегистрированы шесть вариантов вакцины КЭ: две отечественные (для взрослых и детей с 3-летнего возраста) — вакцина КЭ производства ФГУП «ПИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН», вакцина «Энцевир» производства ФГУП «НПО «Микроген»; и четыре зарубежные – «ФСМЕ-Иммун» (для взрослых и подростков с 16 лет), «ФСМЕ-Иммун–Джуниор» (для детей с 1 года и до 16 лет) — обе производства компании «Бакстер–вакцины», Австрия; «Энцепур взрослый» (для взрослых и подростков с 12 лет), «Энцепур детский» (для детей с 1 года и до 12 лет) — обе производства компании «Новартис–вакцины», Германия.

Таблица 1. Специфическая активность вакцин от клещевого энцефалита по результатам изучения иммуногенной активности на мышах Бальб/С с 2006 по 2010 г.

Количество серий отконтролированных в «ГИСК им. Л.А. Тарасевича»

МИД₅₀ (среднее значение), мл

Примечание: МИД₅₀ — минимальная иммунизирующая доза вакцины; лимит МИД₅₀ по НД: ? 0,0125 мл.

Основным показателем качества вакцин КЭ является специфическая активность, определенная в тесте иммуногенности на линейных мышах Балб/С. Сравнительный анализ специфической (иммуногенной) активности при контроле вышеуказанных вакцин в стандартном тесте показывает, что вакцины отечественного производства и вакцины производства компании «Бакстер-вакцины», имеют сходные показатели иммуногенности по МИД₅₀ (минимальная 50% иммунизирующая доза). МИД₅₀ для вакцин компании «Новартис вакцины» выше лимита в 3–5 раз (табл. 1).

Содержание в вакцине вирусного антигена (протективного белка Е) должно быть стандартным. Избыточное содержание вакцинного вирусного антигена может повысить реактогенность вакцины, выражающуюся в появлении температурных реакций от 38°С и выше, головной боли, общем недомогании. Эти явления наблюдаются, как правило, после первой прививки, реже после второй прививки, через 7-8 ч после введения вакцины и проходят на следующий день [3, 4].

Вакцины зарубежного производства: «ФСМЕ-Иммун» (взрослая и детская), «Энцепур» (взрослая и детская) — калиброваны по этому показателю: «ФСМЕ-Иммун» — взрослая — 2,38 мкг/0,5 мл, детская — 1,6 мкг/0,25 мл, «Энцепур взрослый» — 1,5 мкг/0,5 мл, детский — 0,75 мкг/0,25 мл. Данные показатели указаны в инструкциях по применению на эти вакцины. Подбор оптимальной дозы вакцинного антигена проводился при достаточно больших доклинических и клинических исследованиях [2].

Таблица 2. Сравнительное определение титра вакцинного антигена вируса КЭ методом ИФА

№ серий вакцины «Энцевир»

Набор реагентов «ИФА ТС АГ ВКЭ», титр в ИФА вакцинного антигена ВКЭ

Набор реагентов «ВектоВКЭ-Антиген», титр в ИФА вакцинного антигена ВКЭ

Примечания: «ВектоВКЭ-антиген» — производства ЗАО «ВекторБест»; «ИФА ТС АГ ВКЭ» — производства ФГУП «НПО «Микроген».

Отечественные вакцины КЭ по показателю содержания вакцинного вирусного антигена в прививочной дозе не стандартизованы. В связи с этим, целью нашего исследования стала разработка и стандартизация способа количественного определения содержания вакцинного вирусного антигена в вакцине КЭ.

В качестве модели была использована вакцина КЭ «Энцевир», производства ФГУП «НПО «Микроген». Исследования проводились параллельно в ФГБУ «ГИСК им. Л.А. Тарасевича» Минздравсоцразвития России и в НПО «Вирион» – филиале ФГУП «НПО «Микроген» в Томске.

1. Серии вакцины КЭ «Энцевир» производства ФГУП «НПО Микроген».
2. СОП (стандартный образец предприятия) — приготовлен на предприятии НПО «Вирион» согласно рекомендациям ФГБУ «ГИСК им. Л.А. Тарасевича» для определения вакцинного антигена.
3. Наборы реагентов для иммуноферментного выявления антигена вируса КЭ «ВектоВКЭ-антиген», производства ЗАО «Вектор–Бест», Новоси бирск.
4. Наборы реагентов для иммуноферментного выявления антигена вируса КЭ «ИФА ТС АГ ВКЭ» производства ФГУП «НПО «Микроген».
5. Препарат протективного белка Е вируса КЭ — очищенный жидкий белок Е, партия № 41, с концентрацией белка Е — 160 мкг/мл. Получен из ЗАО «Вектор–Бест». Хранение при температуре минус 70°С.

1. Иммуноферментный анализ.
2. Стандартный тест определения специфической активности (иммуногенности) вакцин КЭ при иммунизации линейных мышей Балб/С.
3. Компьютерная программа статистической обработки результатов иммуноферментного анализа методом параллельных линий «Паралайн», разработана докт. биол. наук. В.Г. Петуховым в ФГБУ «ГИСК им. Л.А. Тарасевича» Минздравсоцразвития России [5].

Сравнительный анализ чувствительности двух наборов реагентов для ИФА при титровании серий вакцин Энцевир» проводился следующим образом.

В предварительных опытах нами была установлена озможность титрования сорбированных вакцин КЭ методом ИФА в наборах реагентов для выявления вакцинного антигена вируса клещевого энцефалита: «ВектоВКЭ-антиген», производства ЗАО «ВекторБест» и «ИФА ТС АГ ВКЭ» производства ФГУП «НПО «Микроген». Наборы реагентов различаются по составу основных реагентов: в первом наборе для выявления антигена вируса КЭ используются только моноклональные антитела к белку Е, штамм № 205 вируса КЭ (как в иммуносорбенте, так и в конъюгате). Во втором наборе реагентов для этой цели используются поликлональные антитела, полученные на основе асцитической жидкости крыс, иммунизированных вирусом КЭ.

Таблица 3. Сравнительное титрование методом ИФА препарата белка Е вируса КЭ и СОП вакцинного антигена

Дата постановки опыта в ИФА

Набор реагентов «ИФА ТС АГ ВКЭ»

Набор реагентов «ВектоВКЭ-антиген»

Нами проведено титрование 10 серий вакцины от клещевого энцефалита «Энцевир» в обоих наборах реагентов. Каждая серия вакцины исследовалась в ИФА не менее трех раз. Полученные данные показывают более чем 10-кратное превышение титров антигена при использовании набора реагентов «ВектоВКЭ-антиген» (табл. 2).

В табл. 3 представлены результаты параллельного титрования методом ИФА в обоих наборах реагентов (10 опытов) препарата протективного белка Е вируса КЭ и СОП вакцинного антигена, выполненные в НПО «Вирион». Они подтвердили более высокую чувствительность набора реагентов «ВектоВКЭ-антиген» по сравнению с набором реагентов «ИФА ТС АГ ВКЭ».

Таблица 4. Сравнительные данные по контролю в НПО «Вирион» и аттестации в «ГИСК им. Л.А. Тарасевича» СОП вакцинного антигена вируса КЭ

«ГИСК им. Л.А.Тарасевича»

Пористая масса белого цвета

Потеря в массе при высушивании, %

Содержание общего белка (мкг/ампула)

Содержание сахарозы (мкг/ампула)

Средняя масса содержимого (мкг/ампула)

Иммуногенность (МИД₅₀ в мл)

Специфическая активность (титр в ИФА)

Примечания: НПО «Вирион», г. Томск — тест система «ИФА ТС АГ ВКЭ», сер. № 020310. «ГИСК им. Л.А. Тарасевича» — набор реагентов «ВектоВКЭ–аниген» ЗАО «Вектор – Бест», г. Новосибирск.

Таблица 5. Изучение стабильности СОП в тесте термодеградации (температура 37°С в течение 7 и 14 сут)

Разведения СОП (исх.1:32)

Титрование СОП, ампула № 1

Титрование СОП, ампула № 2

Титрование СОП после теста термодеградации (7 суток)

Титрование СОП после теста термодеградации (14 суток)

Для получения кандидата в СОП нами использована технология производства серийной продукции очищенной и концентрированной вакцины КЭ «Энцевир». СОП готовили на основе полуфабриката вакцины без добавления стабилизатора (альбумин крови человека) и проведения сорбции антигена на геле алюминия гидроксида. Кандидат в СОП вакцинного антигена вируса КЭ серия № 010810 был приготовлен на основе производственной партии очищенного концентрата № 252 культурального антигена вируса КЭ (производственная партия № 252 вошла в серию вакцины «Энцевир» № 103).

К концентрату культурального вакцинного антигена вируса КЭ № 252 был добавлен в качестве стабилизатора раствор сахарозы 50% (из расчета 50 мг сахарозы на 1 мл концентрата). Материал разлит в ампулы по 0,5 мл и лиофилизирован. Всего было получено 736 ампул, дата изготовления — август 2010 г.

В НПО «Вирион» были проведены испытания кандидата СОП по следующим показателям: внешний вид, точность розлива, потеря в массе при высушивании, герметичность, растворимость, прозрачность и цветность растворенного препарата, рН, содержание общего белка, содержание сахарозы, специфическая активность в ИФА, иммуногенность при иммунизации мышей Бальб/С. Для изучения стабильности и определения срока годности СОП, ампулы были заложены на хранение в течение 1 года при различных температурных режимах. После поступления образцов СОП в «ГИСК им. Л.А. Тарасевича» проведена аттестация образцов по тем же показателям. Сравнительные данные по контролю в НПО «Вирион» и аттестации в «ГИСК им. Л.А. Тарасевича» СОП вакцинного антигена вируса КЭ представлены в табл. 4.

СОП, серия №010810, дополнительно изучен в тесте термодеградации, заключающемся в прогревании образцов СОП при температуре 37oС в течение 7 и 14 сут. Специфическую активность в ИФА образцов СОП после теста термодеградации изучали в сравнении с образцом СОП, хранившимся при температуре от 2 до 8°С. Полученные данные представлены в табл. 5. В результате проведенных исследований СОП вакцинного антигена в ИФА снижения активности не наблюдали. По результатам контроля и аттестации серия СОП № 010810 соответствовала требованиям по всем показателям, на СОП было оформлено Свидетельство и Инструкция по применению.

Определение содержания вирусного белка Е в СОП осуществлялось следующим образом. Основную часть вакцинного антигена вируса КЭ составляет вирусный оболочечный белок Е, обеспечивающий протективные (защитные) свойства вакцины [3].

Очищенный белок Е, партия № 41, был получен из ЗАО «ВекторБест» в сентябре 2010 г. Согласно паспорту на этот препарат, получено 240 мкл с концентрацией белка Е — 160 мкг/мл. Хранение препарата при температуре минус 70oС. Для проведения параллельных титрований СОП и вирусного белка Е готовили предварительное разведение белка Е, основываясь на его исходной концентрации. Разведение 1:1000 готовили на растворе для разведения образцов — РРО из набора реагентов «ВектоВКЭ-антиген». Таким же образом готовили предварительное разведение СОП — 1:128.

Дальнейшие разведения СОП и белка Е готовили также на растворе РРО. В каждом конкретном случае последовательные двукратные разведения готовились из предварительных разведений. Расчет концентрации белка Е в СОП проведен на основе параллельного титрования трех ампул СОП на разных планшетах набора реагентов «ВектоВКЭ-антиген» в разное время.

Для статистической обработки данных, полученных при параллельном титровании вирусного белка Е и СОП, подбирали для этих материалов разведения, имеющие сравнимые показатели оптической плотности (ОП) с линейным падением их значений. По полученным цифровым показателям ОП проводили статистическую обработку методом параллельных линий программы «Паралайн». Устанавливали линейность и параллельность графиков зависимости логарифма дозы от логарифма ОП для вирусного белка Е в СОП, и рассчитывали концентрацию вакцинного антигена (белка Е) в мкг/мл по формуле:

где С — концентрация вирусного белка Е в СОП в мкг/мл; М — активность вирусного белка Е, установленная по программе «Паралайн»; С_s — концентрация вирусного белка Е в соответствующем разведении; k — коэффициент (разведение СОП 1:2048).

Границы 95% доверительного интервала для рассчитанной концентрации С вычисляли по формулам:

C_min (минимальное отклонение) = M_min x C_s x k
и C_max (максимальное отклонение) = M_max x C_s x k.

В программу «Паралайн» для вычисления значения М вносили следующие данные: С_s — концентрация белка Е (разведение 1:16000) = 0,01 мкг/мл; К — разведение испытуемого препарата СОП 1:2048; М — вычисляется автоматически по компьютерной программе Паралайн. В соответствии с данными программы «Паралайн» значение М (активность вирусного белка Е) — 0,943 при значениях: min (минимальное стандартное отклонение) — 0,735 и max — (максимальное стандартное отклонение) — 1,213.

С = 0,943 x 0,01 x 2048 = 19,31 мкг/мл;
С_min = 0,740 x 0,01 x 2048 = 15,15 мкг/мл;
С_max = 1,21 x 0,01 x 2048 = 24,78 мкг/мл.

В результате проведенных статистических исследований установлено, что среднее значение содержания вирусного белка Е в СОП составило 9,26 мкг/0,5 мл (табл. 6). Подобные результаты были получены в НПО «Вирион» — содержание белка Е в СОП составило 8,46 мкг/0,5 мл (табл. 7).

Установленная концентрация белка Е в СОП вакцинного антигена вируса КЭ позволила подойти к определению содержания протективного антигена (вирусного белка Е) в сериях вакцины КЭ «Энцевир». Для изучения были подобраны 8 серий вакцины:

• серии № 71, № 72, № 75, № 77: содержание общего белка — от 9,0 мкг/0,5 мл до 9,5 мкг/0,5 мл;
• серии № 90, № 91, № 93, № 95: содержание общего белка — от 5,0 мкг/0,5 мл до 6,0 мкг/0,5 мл.

Проведено параллельное титрование серий вакцины «Энцевир» по отношению к СОП вакцинного антигена вируса КЭ. Титрование каждой серии вакцины «Энцевир» методом ИФА проводилось не менее 3 раз. Показано, что в сериях вакцины, содержавших при контроле меньшее количество общего белка (№ 90, 91, 93, 95), определялась более низкая концентрация белка Е — 2,99 мкг/амп (среднее значение) по сравнению с сериями № 71, 72, 75, 77 — среднее значение вирусного вакцинного антигена по белку Е — 4,91 мкг/амп (табл. 8).

1. Разработан и стандартизован способ количественного определения содержания вакцинного вирусного антигена (белок Е) в вакцине клещевого энцефалита.
2. Разработан и аттестован СОП вакцинного антигена вируса КЭ соответствующий требованиям стандартизации к СОП; оформлены свидетельство и инструкция по применению СОП.
3. СОП вакцинного антигена вируса КЭ калиброван по содержанию вирусного протективного белка Е.

1. Злобин В.И. Современные проблемы эпидемиологии и профилактики клещевого энцефалита в Российской Федерации // Биопрепараты. — 2004. — № 2 (14). — С. 4–7.
2. Кунц К. Австрийский опыт вакцина — вакцинации против клещевого энцефалита // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. — 2004. — № 1. — С. 37–41.
3. Локтев В.Б. Терновой В.А. Нетесов С.В. Молекулярно-генетическая характеристика вируса клещевого энцефалита // Вопросы вирусологии. — 2007. — № 5. — C. 10–16.
4. Воробьева М.С. Ладыженская И.П. Расщепкина М.П. и др. Оценка качества отечественных иммуноферментных тест-систем для ранней диагностики КЭ // Материалы расширенного пленума проблемной комиссии «Клещевой и другие вирусные энцефалиты» РАМН, 9-10 декабря 2003 г. — М. 2003. — С. 53–54.
5. Петухов В.Г. Свидетельство об официальной регистрации программы для ЭВМ «Паралайн», 2006.

Поликлиника на Ломоносовском пр. 43:

Тел: +7 (499) 147-90-03; +7 (499) 143-61-69

1154 ВектоВКЭ

Единица измерения: набор

товар под заказ

Набор реагентов для иммуноферментного выявления и подтверждения наличия иммуноглобулинов классов G и M к вирусу гепатита С.Непрямой ИФА ДвухстадийныйЧувствительность: не менее 100% по ОСО+Специфичность: не менее 100% по ОСО-Объем исследуемого образца, мкл: не более 40 мклКоличество определений (включая контроли): не менее 48Время реакции (включая время цветной реакции): не более 1 час 20 мин Наличие унифицированных неспецифических компонентов: ФСБ-Т, СБР, ТМБ, стоп-реагент Наличие пленки для заклеивания планшетовСрок годности набора: не менее 12 месНаличие регистрационного удостоверения

© Медицинские Инновационные Технологии
Информация на данном сайте предназначена только
для специалистов здравоохранения

Тел: (351) 218-41-49 Телефон многоканальный.
Факс: (351) 248-52-53
E-mail: mdnt@mdnt.ru
Адрес: 454128, г. Челябинск, ул. 40-летия Победы, 30 - 5

Инструкция вектовкэ антиген

ИФС для выявления антител к вирусу клещевого энцефалита

Скрыть Фармакологическая группа по АТК

V04CX. Диагностические препараты прочие

Скрыть Методы применения и принцип действия

1. НАЗНАЧЕНИЕТест-система предназначена для выявления иммуноглобулинов класса М к вирусу клещевого энцефалита в сыворотке (плазме) крови человека, и может быть использована в клинических и эпидемиологических исследованиях для диагностики клещевого энцефалита.
2. СОСТАВ НАБОРАпланшет разборный с иммобилизованными антителами к IgM человека - 1 шт.; положительный контрольный образец, инактивированный (К+; прозрачная жидкость красного цвета) - 1 фл. 1,3 мл; отрицательный контрольный образец, инактивированный (К-) - 1 фл. 2,5 мл; раствор для предварительного разведения сывороток (жидкость малинового цвета) - 1 фл. 10 мл; раствор для разведения сывороток (РРС) - 1 фл. 12 мл; антиген ВКЭ (сухой) - 1 ампула; стабилизирующий раствор для разведения антигена ВКЭ - 1 фл. 1,5 мл; конъюгат (моноклональные антитела к ВКЭ, меченные пероксидазой хрена; жидкость синего цвета) - 1 фл. 1,3 мл; раствор для разведения конъюгата (РРК) - 1 фл. 12 мл; концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ-Т, 25+) - 1 фл. 28 мл; цитратно-фосфатный буферный раствор с перекисью водорода (ЦФР) - 1 фл. 12 мл; тетраметилбензидин (ТМБ), концентрат - 1 фл. 1 мл; стоп-реагент - 1 фл. 12 мл; плёнка липкая - 2 шт.
3. ПОДГОТОВКА АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВДля проведения ИФА не рекомендуется использовать гемолизированные, гиперлипидные или повторно замороженные сыворотки. Допускается хранение образцов сывороток при 2-8-С в течение 48 часов, либо при -20-С в течение 3 месяцев. После размораживания образцы тщательно перемешать. При необходимости образцы очистить центрифугированием при 5-10 тыс. об./мин.
4. ОБЩИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ- При работе с исследуемыми сыворотками и контрольными образцами следует соблюдать меры предосторожности, принятые при работе с потенциально инфекционным материалом: работать в резиновых перчатках; не пипетировать растворы ртом; все использованные материалы подвергать обработке 6%-ным раствором перекиси водорода (не менее 6 часов). Внимание! Несоблюдение описанных ниже требований может привести к искаженному результату ИФА. Необходимо предъявлять высокие требования к чистоте лабораторной посуды, наконечников, ванночек и т.п. поскольку даже следы применяемых дезинфицирующих и моющих средств приводят к искажению результатов ИФА. Предпочтительно использование одноразовой посуды. При многократном использовании контейнера или ванночки для компонента их следует использовать всегда для одного и того же реагента, при повторном применении следует тщательно промыть дистиллированной водой до и после каждого использования. Для работы с набором следует использовать дистиллированную воду высокого качества, так как компоненты набора очень чувствительны к микробиологическому загрязнению, хлорноватистой кислоте и ароматическим хлорсоединениям, ионам металлов, зачастую находящихся в воде. При постановке ИФА нельзя использовать компоненты из наборов разных серий или смешивать их при приготовлении растворов. При использовании автоматического вошера или гребёнки ёмкость и шланги для промывочного раствора рекомендуется 1 раз в неделю обрабатывать 70%-ным спиртом с последующей отмывкой дистиллированной водой. Перед постановкой реакции все компоненты тест-системы необходимо выдержать в течение часа при температуре 18-25-С. Запрещается многократное использование планшета для предварительного разведения сывороток. После постановки реакции плотно закрыть флаконы с компонентами, упакованные стрипы поместить в холодильник, использовать в течение 4 недель.
5. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ(для проведения реакций на 1 стрипе)5.1. Подготовка стриповВскрыть цефленовый пакет с планшетом со стороны замка, отступив примерно 1 см. Для проведения ИФА рассчитать необходимое количество стрипов. Оставшиеся стрипы хранить в цефленовом пакете с замком. Стрипы стабильны после первого вскрытия пакета в течение 4 недель. 5.2. Подготовка контрольных образцовКонтрольные образцы готовы к использованию и не требуют дополнительного разведения. 5.3. Подготовка исследуемых сыворотокИсследуемые сыворотки развести в 10 раз раствором для предварительного разведения сывороток. Для этого, используя вспомогательный ряд пробирок или вспомогательный планшет, к 90 мкл раствора добавить 10 мкл цельной сыворотки, тщательно перемешать. При этом цвет раствора должен измениться с малинового на жёлтый. Если изменения цвета не произошло, сыворотка для анализа не годится. Внимание: разведённую сыворотку не хранить! 5.4. Приготовление раствора для отмывки планшета (ФСБ-Т однократный)Содержимое одного флакона с концентратом ФСБ-Т развести дистиллированной водой до 700 мл. При выпадении осадка солей в концентрате необходимо прогреть его при 30-40 -С до полного растворения осадка. Хранение: до 4 недель при 2-8 -С. 5.5. Приготовление раствора антигена ВКЭСодержимое ампулы с антигеном ВКЭ растворить в 1,5 мл стабилизирующего раствора. Хранение: до 4 недель при 2-8 -С. 5.6. Приготовление раствора конъюгатаГотовить непосредственно перед использованием!В чистый флакон внести 1 мл раствора для разведения конъюгата (РРК) и добавить по 0,1 мл конъюгата и антигена ВКЭ в стабилизирующем растворе, тщательно перемешать (см. таблицу). 5.7. Приготовление раствора ТМБГотовить непосредственно перед использованием!В чистом флаконе растворить 70 мкл концентрата ТМБ в 1 мл ЦФР, тщательно перемешать. При приготовлении раствора ТМБ следует исключить воздействие света (например, обернуть флакон фольгой). Внимание! Рекомендуем выделить отдельную посуду и наконечники для пипетки, которые использовать только для работы с раствором ТМБ. Посуду и пипетки (наконечники), контактирующие с раствором ТМБ, нельзя отмывать с применением синтетических моющих средств, поскольку даже их следы ведут к неконтролируемому разложению ТМБ в ходе реакции.
6. ПРОВЕДЕНИЕ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗАВнимание! Внесение контрольных и исследуемых образцов проводить достаточно быстро, в течение 5-10 мин, так как при более длительном внесении образцов в лунки планшета время инкубации первого и последнего образцов значительно отличаются, что может привести к неправильной оценке результатов. 6.1. Для нанесения контрольных образцов рекомендуется следующая схема: при использовании 1 стрипа - 1 лунка К+ и 2 лунки К- 2 стрипов - 2 лунки К+ и 2 лунки К- 3 и более - 2 лунки К+ и 3 лунки К- Согласно схеме в лунки стрипа, например, А-1 и В-1, внести по 100 мкл К-. В лунку С-1 внести 100 мкл К+. В остальные лунки внести по 90 мкл РРС и по 10 мкл предварительно подготовленных исследуемых сывороток (п. 5.3). Таким образом, исследуемая сыворотка в лунке разбавляется в 100 раз. Отрезать липкую плёнку требуемого размера. Стрип закрыть, плотно прижав плёнку, поместить во влажную камеру. Инкубировать при температуре 37-С в течение 60 мин. 6.2. После окончания инкубации осторожно снять плёнку, поместить её в дезинфицирующий раствор. Лунки промыть 5 раз раствором для отмывки планшета (п. 5.4) и 2 раза дистиллированной водой. При этом в каждую лунку необходимо вносить не менее 250 мкл в процессе одного промывания. Раствор из лунок тщательно удалить, постукивая перевёрнутым стрипом по фильтровальной бумаге. 6.3. В каждую лунку стрипа внести по 100 мкл раствора конъюгата (п. 5.6). Отрезать плёнку требуемого размера. Стрип закрыть плёнкой, поместить во влажную камеру. Инкубировать 60 мин при 37-С. 6.4. По окончании инкубации стрип промыть 6 раз раствором для отмывки планшета и 2 раза дистиллированной водой, как описано в п. 6.2. Раствор из лунок тщательно удалить постукиванием перевёрнутого стрипа по фильтровальной бумаге. За 5 мин до окончания инкубации приготовить раствор ТМБ (п. 5.7). 6.5. Внести в каждую лунку по 100 мкл раствора ТМБ и инкубировать в течение 20-25 мин при температуре 18-25-С в темноте. 6.6. Остановить реакцию добавлением в лунки по 100 мкл стоп-реагента. В случае попадания на кожу раствора ТМБ или стоп-реагента необходимо немедленно смыть их водой с мылом.
7. КРАТКАЯ СХЕМА ИФА:Использовать только после тщательного ознакомления с инструкцией!
Внести: 100 мкл К+, К-, 90 мкл РРС и 10 мкл предварительно разведенныхобразцов, 60 мин, 37-С.Промыть: ФСБ-Т однократный - 5 раз, вода дистиллированная - 2 раза.Внести: 100 мкл разведенного конъюгата, 60 мин, 37-С.Промыть: ФСБ-Т однократный - 6 раз, вода дистиллированная - 2 раза.Внести: 100 мкл раствора ТМБ в ЦФР, 20-25 мин, 18-25-С.Внести: 100 мкл стоп-реагента.Измерить: ОП при 450 нм.

8. РЕГИСТРАЦИЯ И ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВРезультаты ИФА регистрируют с помощью спектрофотометра, измеряя оптическую плотность (ОП) на длине волны 450 нм. Измерения проводят сразу после остановки реакции. Качество тест-системы считают удовлетворительным, если среднее значение оптической плотности (ОП) отрицательного контрольного образца (ОПср К-) не превышает 0,20 о.е. а среднее значение ОП положительного контрольного образца не менее чем в 3 раза превышает ОПср К-. Результат анализа считают положительным, если значение ОП в соответствующей лунке равно или превышает критическое значение (ОПкрит), которое вычисляют по формуле: ОПкрит = ОПср К- + 0,2 Для интерпретации результатов исследования мы рекомендуем использовать коэффициент позитивности (КП): КП= ОПиссл. сыв. ОПкрит.
Если КП < 1, результат оценивается как отрицательный. Если КП. 1, исследуемая сыворотка расценивается как положительно реагирующая.
Коэффициент позитивности - удобная и простая величина для наблюдения заболевания в динамике.

OoYes.ru ©creative studio © 2010 MegaApteka.ru // Информационный портал об аптеках, лекарствах, болезнях и способах их лечения.
Информация на сайте носит исключительно информационный характер, по всем способам лечения необходимо проконсультироваться с Вашим лечащим врачом.